各種HRP酶標(biāo)記成抗體的效價(jià)測(cè)定程序如下(如:羊抗鼠IgG-HRP的效價(jià)測(cè)定):
1、抗原包板:15ug/ml 小鼠IgG-pH9.6·CB液 0.1ml/孔;
2、37°C包被60min或4°C過(guò)夜;
3、PBST洗板3次,5min/次;
4、加入倍比稀釋的HRP標(biāo)記抗體 0.1ml/孔;
5、37°C 30min;
6、PBST洗板5min/次×3;
7、底物液0.1ml/孔 37°C 5-10min;
8、終止液:2N H2SO4 0.05ml/孔;
9、450nm 測(cè)定OD值;
10、陽(yáng)性O(shè)D值比對(duì)照值大3倍,為判斷效價(jià)稀釋度。