重組兔單克隆抗體制備 服務編號：SV1600
本服務項目主要是根據客戶的要求制備兔單克隆抗體，兔單抗具有高特異性、強親和力的優(yōu)點。兔因其免疫系統發(fā)育的特殊性，能有效識別在小鼠中免疫原性低的抗原或半抗原。因此，與鼠單抗相比，兔單抗在科研、診斷和醫(yī)療多個領域有著更好的表現與廣泛的應用，且有更高的親和力和特異性，可識別更多抗原表位，有更多的候選陽性克隆，更易于人源化特點。
單B細胞抗體開發(fā)技術是通過流式分選技術，從免疫動物或康復者外周血中分離抗原特異性B細胞，利用單細胞測序技術從單一B細胞中提取抗體重、輕鏈基因，并將抗體基因序列插入高表達載體，從而實現抗體的高效開發(fā)與表達。該技術獲得抗體重、輕鏈基因天然配對、易于改造，抗體親和力高。相比傳統方法（如雜交瘤技術），單B細胞抗體技術顯著縮短了開發(fā)周期；能夠以較少的細胞量獲得更多的特異性單克隆抗體，且陽性克隆數量顯著高于傳統方法。
噬菌體展示技術(Phage Display)是采用分子克隆技術從脾臟或外周血PMBC中提取抗體重、輕鏈基因，通過基因工程技術將抗體的重、輕鏈基因克隆至噬菌粒載體，將抗體基因與噬菌體外殼蛋白（如pIII）融合表達，使抗體展示在噬菌體表面，構建噬菌體文庫，然后通過加壓篩選獲得高親和力的陽性克隆。噬菌體文庫包括包括天然抗體庫、免疫抗體庫、人工改造的庫等，相比傳統抗體開發(fā)技術，噬菌體展示技術可以針對各種抗原的抗體，包括蛋白質、多肽、細胞表面抗原等篩選和富集數百萬個不同的抗體，極大地提高了篩選效率，并且保留了樣本中抗體種類的多樣性。噬菌體展示技術是一種高效、快速的抗體開發(fā)技術，具有高通量、高多樣性和易于操作的特點。通過直接展示抗體蛋白在噬菌體表面，該技術能夠快速篩選出高特異性和高親和力的抗體，廣泛應用于治療性抗體開發(fā)、診斷試劑制備和基礎研究等領域。
Tip: 請您填寫項目申請表。以便Bioss為您提供更好的技術服務。
一、 服務流程
1、客戶提交重組兔單克隆抗體制備請求并明確對抗體的要求，與公司商定具體的制備項目、數量和費用，雙方簽訂《委托單克隆抗體制備合同》。
2、客戶提供抗原或抗原信息，我公司按照合同要求安排重組兔單克隆抗體制備服務，并在規(guī)定時間內完成制備委托。
3、抗體制備完成后，我公司按照客戶要求純化分裝，免費低溫郵寄給客戶，同時提供抗體制備報告。
二、 樣品要求
1、客戶提供制備抗體所需蛋白或多肽片段，抗原純度＞85%，數量＞10mg，濃度＞1mg/ml。
2、客戶提供的抗原信息應包含蛋白抗原的英文全稱、種屬信息、GeneID或序列信息；化合物抗原應提供化學結構式、活性基團、溶解性等信息。
3、請?zhí)崆罢f明樣品來源和生物危害等情況，或其他任何特殊情況。
三、兔單克隆抗體收費標準
1、單B細胞平臺
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服務項目 |
服務內容 |
周期 |
收費 |
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抗原制備 |
a.甲方提供xxx蛋白抗原，或多肽偶聯蛋白10mg（抗原無毒性）， 乙方用于免疫動物和檢測 |
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b. 客戶提供多肽，博奧森偶聯載體蛋白 |
1周 |
詢價 |
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c. 原核系統表達蛋白 |
4周 |
詢價 |
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d. 設計、合成多肽、偶聯載體蛋白（15aa左右） |
2周 |
詢價 |
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e. 磷酸化、甲基化修飾多肽、偶聯載體蛋白 （包括：設計修飾多肽兩條，分別合成及偶聯，未修飾多肽一條） |
2周 |
詢價 |
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f. 特殊修飾多肽 |
4周 |
詢價 |
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動物免疫 血清檢測 |
免疫2只新西蘭大白兔，免疫3-4次，血清效價采用間接ELISA法， 最終取一只達到效價>1:16000以上，可滿足單細胞分選 注：甲、乙雙方根據檢測結果最終判定是否項目需要繼續(xù)進行 （結果要及時反饋）；甲方自行選擇是否進行內源性驗證 |
4-6周 |
詢價 |
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B細胞分選與培養(yǎng) |
選出免疫應答最佳的1只兔子，從脾臟或全血中分離PBMC， 采用IgG陽性和抗原特異性雙陽性通過流式細胞術（FACS） 分選記憶性單B細胞至10個96孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng) |
2周 |
詢價 |
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陽性克隆對篩選 及B細胞的測序 |
對經培養(yǎng)的B細胞克隆進行抗原ELISA篩選，陽性B細胞上清供 甲方進行測試，選取10株單克隆進行單B細胞測序， 獲取抗體輕重鏈基因序列。
注：甲方自行選擇是否進行內源性驗證 |
1-2周 |
詢價 |
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陽性克隆抗體的 重組表達 |
將擴增得到的抗體基因插入帶有恒定區(qū)基因的表達載體中， 然后選擇合適的表達系統進行表達， 然后采用Protein A親和純化，最終每個兔單抗交付不超過50ug |
4周 |
詢價 |
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抗體的擴大培養(yǎng) 與純化 |
根據客戶選定的2-3株克隆，進行擴大培養(yǎng)， 并通過親和層析等純化方法提純抗體
注：甲方自行選擇是否進行內源性驗證 |
2周 |
詢價 |
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產品交付 |
1、2-3個兔單克隆抗體100ug 2、2-3個挑選的兔單抗對應的抗體序列 3、項目報告 |
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2、 噬菌體展示平臺
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服務項目 |
服務內容 |
周期 |
收費 |
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抗原制備 |
a.甲方提供xxx蛋白抗原，或多肽偶聯蛋白10mg（抗原無毒性）， 乙方用于免疫動物和檢測 |
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b. 客戶提供多肽，博奧森偶聯載體蛋白 |
1周 |
詢價 |
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c. 原核系統表達蛋白 |
4周 |
詢價 |
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d. 設計、合成多肽、偶聯載體蛋白（15aa左右） |
2周 |
詢價 |
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e. 磷酸化、甲基化修飾多肽、偶聯載體蛋白 （包括：設計修飾多肽兩條，分別合成及偶聯，未修飾多肽一條） |
2周 |
詢價 |
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f. 特殊修飾多肽 |
4周 |
詢價 |
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動物免疫 血清檢測 |
免疫2只新西蘭大白兔，免疫3-4次，血清效價采用間接ELISA法， 最終取一只達到效價>1:16000以上，可滿足繼續(xù)實驗； 注：甲、乙雙方根據檢測結果最終判定是否項目需要繼續(xù)進行 （結果要及時反饋） |
8-10周 |
詢價 |
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B細胞收集 |
采集外周血，分離PBMC或取脾臟組織，提取總RNA， 采用RT-PCR制備cDNA |
1周 |
詢價 |
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噬菌粒的構建 與轉化 |
1、噬粒構建與轉化：以cDNA為模板、PCR擴增兔輕、 重鏈可變區(qū)基因，兔VH、VL基因拼接噬菌粒載體， 電擊轉化TG1宿主菌，構建噬菌體文庫 2、文庫鑒定：隨機挑選24個克隆，PCR鑒定陽性率 3、文庫phage制備：文庫培養(yǎng)擴增+輔助噬菌體侵染包裝， 表達成phage庫 |
4-5周 |
詢價 |
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噬菌體文庫篩選 |
1、采用固相篩選等多種方式，進行親和篩選，篩選高親和力兔單抗 2、挑取96個克隆培養(yǎng)擴增+IPTG誘導表達+ELISA檢測陽性克隆 3、挑取全部陽性克隆進行基因測序 |
4-5周 |
詢價 |
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表達抗體（備選） |
選擇真核表達系統進行表達 |
2-4周 |
詢價 |
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抗體鑒定（備選） |
對純化后的抗體進行最終鑒定，ELISA、WB、SPR等 |
1周 |
詢價 |
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產品交付 |
1、實驗報告，包括流程，檢測報告 2、陽性克隆序列 3、陽性菌株 4、噬菌體免疫文庫 |
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bioss
