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發(fā)表者：北京博奧森生物      發(fā)表時(shí)間：2018-11-19

本期導(dǎo)讀：樣本的制備是IHC實(shí)驗(yàn)成功的前提條件。樣本完成石蠟包埋后，需要成約3-4um的薄片。本文主要介紹了切片小技巧及過(guò)程中容易出現(xiàn)的16種問(wèn)題（點(diǎn)擊獲取全部列表）進(jìn)行了一一分析。

切片小技巧

① 組織切片，舊刀修片，新刀切片。

②切片厚度3-4μm（淋巴結(jié)、扁桃體、鼻咽、扁桃體2-3μm；脂肪5-6μm）

③切片毛筆應(yīng)順著刀背往刀鋒掃。

④切片動(dòng)作輕，用力均勻。

⑤室溫、冷凍等溫度要適宜，易于切出薄片。

⑥刀片鋒利，切片角度5°最佳，切片平整無(wú)褶皺和收縮。

⑦切片方向：纖維、肌肉走向與切片平行；原則為軟→硬，易→難，主→次。

⑧蠟塊表面有鈣點(diǎn)，應(yīng)20%HCL表面泡1-2h，水洗后切。

⑨切片人員應(yīng)細(xì)心操作，防劃傷，切后維護(hù)保養(yǎng)機(jī)器。

展片、撈片、烤片注意事項(xiàng)

?切片光面朝下展片、撈片。

?避免切片被污染。

?攤片水溫利于展平又不熔化，必要時(shí)用20%酒精攤片。

?用鑷子輔助將組織貼在玻片合適的位置。

?細(xì)小組織（穿刺、內(nèi)鏡小標(biāo)本）可以多貼幾個(gè)。

?玻片干凈，防止脫片（血塊、腦組織、脂肪）。

?在烘烤切片前應(yīng)做好排水，烤片溫度高于石蠟熔點(diǎn)5-10℃。

切片常見(jiàn)的16種問(wèn)題及解決方法

問(wèn)題1 細(xì)胞皺縮和收縮；核“起泡”變大損傷；膠原染色嗜堿性

原因：石蠟溫度過(guò)高。

解決方法：烤箱溫度高于石蠟熔點(diǎn)5-10℃為佳。

問(wèn)題2 切片卷成致密團(tuán)

原因：①刀鈍；②傾斜角太??；③切片太厚。

解決方法：①換新刀片；②如果間隙角充分，降低傾刀的斜度。

問(wèn)題3 切片破碎或切不成片

原因：①組織固定、脫水、透明不徹底，浸蠟不透；②浸蠟包埋溫度過(guò)高或時(shí)間過(guò)久。

解決方法：①優(yōu)化組織處理；②及時(shí)更換試劑；③重新脫水補(bǔ)救；或者重取。

問(wèn)題4 過(guò)分的壓縮

原因：①刀片鈍；②組織或石蠟過(guò)軟；③用力太猛，速度太快。

解決方法：①換刀片，移刀鋒；②使組織表面變冷，重新切?。?/span>③動(dòng)作輕，用力均勻。

問(wèn)題5 切片不成連片
原因：①刀刃不鋒利，刀間隙角度大；②蠟塊內(nèi)組織上下端留蠟邊太少或不整齊，刀邊碎片；③室溫過(guò)低或石蠟過(guò)硬。

解決方法：①移動(dòng)刀口或更換刀片，檢查刀的角度，清潔刀片和刀架背面；②在低熔點(diǎn)的石蠟中重新包埋；③提高室內(nèi)溫度或溫暖蠟塊表面（哈氣等）；④切片厚度適宜（根據(jù)組織類(lèi)型）。

問(wèn)題6 切片易粘附與組織塊

原因：①間隙角不足；②室溫過(guò)高或包埋石蠟熔點(diǎn)低；③刀片、組織塊邊緣的碎片；④組織帶靜電。

解決方法：①增加間隙角；②清潔刀邊；③修剪組織塊的邊緣；④濕潤(rùn)切片機(jī)周?chē)目諝?，地上?/span>水，開(kāi)啟加濕器；⑤放置靜電防護(hù)器或切片機(jī)附近放置干燥板。

問(wèn)題7 切片條帶彎曲不直

原因：①蠟塊上下兩面不平行；②蠟塊下邊與刀口不平行；③切片處刀鋒不一致；④組織本身硬度不一致。

解決方法：①重新修整蠟塊，使上下兩邊平行；②將蠟塊移正，與刀口保持平行；③移動(dòng)刀片或更換刀片；④修去組織較軟側(cè)的蠟塊。

問(wèn)題8 蠟塊組織脫落

原因：①在粗修蠟塊時(shí)，先放組織后放蠟，否則組織與包埋蠟塊黏貼不牢；②蠟塊凍時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，切片時(shí)易出現(xiàn)蠟塊脫落現(xiàn)象。

解決方法：①包埋先放石蠟后放組織，速度盡可能快；②切片動(dòng)作小、勻速。

問(wèn)題9 組織切片不完整，缺損

原因：①取材時(shí)未取中病灶，組織塊太大，太厚；②多塊組織包埋是排列不佳；③組織塊內(nèi)組織不平坦；④組織包埋方向失誤；⑤切片時(shí)粗修過(guò)多（切削過(guò)深）或過(guò)少（沒(méi)切到足夠的深度）。

解決方法：①組織太大，脫水 不好，取材厚度3mm為佳；②組織在包埋模中均勻鋪平；③熟悉各種組織的切片特點(diǎn)，避免包埋方向的失誤（囊壁、管腔豎直包埋）；④切片方向：軟到硬，易到難，主到次。

問(wèn)題10 切片過(guò)厚

原因：①切片機(jī)維護(hù)不當(dāng)，切片厚度設(shè)置錯(cuò)誤；②石蠟太軟（熔點(diǎn)低）；③石蠟過(guò)熱；④刀鈍。

解決方法：①降低切片厚度設(shè)置；②定期校準(zhǔn)和保養(yǎng)；③使用適合組織類(lèi)型和密度熔點(diǎn)的石蠟；④常規(guī)病理組織切片厚度在3-4μm，淋巴結(jié)、脾臟、胸腺、鼻咽組織等含巴細(xì)胞成分較多的組織，薄切2-3μm，脂肪5-6μm。

問(wèn)題11 切片縱裂，損傷，刀痕

原因：①組織中鈣化點(diǎn)、釘、縫合線(xiàn)或紙屑等異物；②刀片缺口；3刀口不潔，含有毛屑、碎組織、皮棉或石蠟等；④石蠟中有雜質(zhì)。

解決方法：①更換刀片或移動(dòng)刀口；②使用面脫鈣方法（20%HCl）；③仔細(xì)清潔刀刃以除去多余的石蠟堆積；④如果石蠟中有異物，用干凈的石蠟重新包埋。

問(wèn)題12 切片厚薄不均勻/跳刀/百葉窗/搓衣板

原因：①組織脫水過(guò)度；②切片刀不鋒利，刀間隙角（或傾斜度）太大；③切片速度太快

④切片機(jī)部件松動(dòng)或磨損；⑤組織致密或堅(jiān)實(shí)；⑥主軸伸出太長(zhǎng)。

解決方法：①處理過(guò)程中減少脫水時(shí)間；②更換刀片，減少傾斜度；③哈氣；④均速慢切；⑤確保刀和組織的有關(guān)螺絲擰緊夾牢；⑥主軸搖回復(fù)原。

問(wèn)題13 褶皺/折疊

原因：①攤片溫度不合適，組織未充分伸展；②刀片不鋒利，刀角度大；③石蠟熔點(diǎn)低，過(guò)軟或室溫較高；④組織缺乏一致性。

解決方法：①調(diào)小刀角度，邊切邊向蠟塊吹氣用10-20%酒精攤片，利用濃度差，水的張力來(lái)展片；②檢查攤片水溫，太冷不易展開(kāi)；太熱會(huì)產(chǎn)生褶皺或折疊，組織細(xì)胞散開(kāi)；③更換刀片或移動(dòng)刀口；④切片厚度是否合適。

問(wèn)題14 切片裂縫/碎裂

原因：①組織固定和處理不完全，攤片是發(fā)生裂解；②攤片水溫過(guò)高，攤片時(shí)間長(zhǎng)導(dǎo)致過(guò)度延伸；③攤片時(shí)鑷子撐開(kāi)過(guò)大；④烤片前切片排水不凈。

解決方法：①確保固定和處理完全；②在攤片時(shí)輕輕延伸蠟帶，去除褶皺和折疊；③降低攤片水溫（通常低于包埋蠟熔點(diǎn)的5-10℃）；④在切片和漂片過(guò)程中，小心操作蠟帶；⑤在烘烤切片前應(yīng)很好的排水。

問(wèn)題15 柵狀裂和龜裂

原因：①固定、透明、浸蠟不充分；②攤片水溫過(guò)高；③過(guò)度脫水，去除了蛋白質(zhì)結(jié)合的水，組織發(fā)脆，當(dāng)漂浮在水面上是可能會(huì)裂開(kāi)；④切片過(guò)程中過(guò)度冷凍。

解決方法：①優(yōu)化組織脫水過(guò)程；②降低攤片水溫；③切片過(guò)程中勿使用冷卻噴霧劑，細(xì)胞易縮??；④勻速慢切，邊切邊對(duì)蠟塊吹氣。

問(wèn)題16 切片中有氣泡

原因：撈片時(shí)切片下面有氣泡。

解決方法：①保持溫水干凈，無(wú)雜質(zhì)；②切片要干凈無(wú)污染；③撈片前將組織下的氣泡趕走。