本期導(dǎo)讀：HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。一張質(zhì)量上乘的HE切片是病理醫(yī)生得以做出正確診斷的關(guān)鍵。影響HE染色質(zhì)量的因素是多方面的。本文主要對(duì)HE染色中常見(jiàn)的幾個(gè)問(wèn)題及其對(duì)策進(jìn)行分析討論。
蘇木精——伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡(jiǎn)稱(chēng)HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色 ；伊紅為酸性染料 ，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。
HE染色過(guò)程：
?將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘。
?酸水及氨水中分色，各數(shù)秒鐘。
?流水沖洗1小時(shí)后入蒸餾水片刻。
?入70％和90％酒精中脫水各10分鐘。
?入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘。
?染色后的切片經(jīng)純酒精脫水，再經(jīng)二甲苯使切片透明。
?將已透明的切片滴上加拿大樹(shù)膠，蓋上蓋玻片封固。
HE染色常見(jiàn)的問(wèn)題及解決方法
問(wèn)題1 切片呈霧狀/發(fā)灰/發(fā)白，核染色模糊
原因：①待封還潮；②蘇木素過(guò)氧化老化，冰醋酸揮發(fā)；③脫水，透明劑不良，雜質(zhì)過(guò)多；
解決方法：①空氣除濕；②蘇木素過(guò)濾后加入冰醋酸（促染劑）；③常規(guī)更換酒精，二甲苯。
問(wèn)題2 染色不均
原因：①固定不充分；②高濃度酒精脫水時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；③浸蠟不佳；④染色時(shí)間掌握不好；
解決方法：①定期更換染色液；②用2%鐵明礬處理；③浸蠟溫度高于熔點(diǎn)2℃左右；④蘇木素染色鏡下控制。
問(wèn)題3 細(xì)胞成分藍(lán)色，如粘液，膠原蛋白或平滑肌
原因：①蘇木素溶液過(guò)染；②分化不充分；③蘇木素溶液的PH值＞3；
解決方法：①縮短染色時(shí)間；②用1%鹽酸酒精分化2-5s，洗脫過(guò)染胞核，不應(yīng)著色的組織成分；③用乙酸調(diào)節(jié)蘇木素PH值為2.5；④提高酸性酒精的濃度。
問(wèn)題5 胞質(zhì)染色太深
原因：①切片在伊紅溶液中時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；②伊紅染色后分化不足；③伊紅染液可能過(guò)濃；
解決方法：①減少伊紅溶液染色時(shí)間，稀釋伊紅染液；②85%酒精增加分化時(shí)間。
問(wèn)題6 胞質(zhì)染色太淡
原因：①伊紅染液使用時(shí)間太久；②伊紅染液的PH值＞4.5，乙醇脫水易褪色；③伊紅染液后酒精沖洗不正確；④伊紅染色時(shí)間太短；
解決方法：①更換新鮮的伊紅染液；②用濃醋酸調(diào)節(jié)伊紅染液PH值（4~4.5），伊紅PH值＜3.6，核發(fā)紫，對(duì)比不強(qiáng)；伊紅染液PH值＞5，染不上；③減少伊紅步驟后酒精沖洗的時(shí)間；④增加伊紅溶液的染色時(shí)間。
問(wèn)題7 細(xì)胞核發(fā)紅棕色
原因：①蘇木素染色液氧化過(guò)度；②返藍(lán)不足；
解決方法：①及時(shí)更換然染液；②返藍(lán)可用流水、溫水或稀氨水、0.2%碳酸氫鈉等。
舉栗
Ⅰ 正常染色（細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞漿呈玫紅色，顏色分明）（腎）
Ⅱ 細(xì)胞成分藍(lán)色（胎盤(pán)）
Ⅲ 切片呈霧狀/發(fā)灰/發(fā)白，核染色模糊（胎盤(pán)）
Ⅳ 胞質(zhì)染色太深（肝）
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