為何優(yōu)化流式實(shí)驗(yàn)？
流式細(xì)胞術(shù)(FCM)工作流程中的所有步驟對(duì)獲取可發(fā)表的高品質(zhì)圖像都至關(guān)重要。尤其是利用正確的抗體去識(shí)別抗原以及放大信號(hào)是實(shí)現(xiàn)最佳顯示的關(guān)鍵。每年不斷有高分文獻(xiàn)引用Bioss流式抗體。
在選擇好抗體，設(shè)置好對(duì)照之后結(jié)果仍不理想，可以從以下三方面考慮優(yōu)化細(xì)節(jié)：
一、優(yōu)化抗體使用濃度
圖1.為細(xì)胞對(duì)不同濃度的BMAL1(bs-3750R)、Jak3(bs-2808R)染色結(jié)果，可以看出抗體使用量不同時(shí)，陽(yáng)性峰偏移程度有所不同。
如圖2.所示，死細(xì)胞的自發(fā)熒光水平很高，且容易攝取抗體導(dǎo)致非特異性結(jié)合，最終影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果;還可能會(huì)釋放DNA，DNA非常粘稠，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)，容易堵塞管路。
圖2. 全部細(xì)胞(All)與活細(xì)胞(Live)自發(fā)熒光區(qū)別
? 蛋白結(jié)合染料：結(jié)合細(xì)胞表面或膜內(nèi)的游離胺，活細(xì)胞弱陽(yáng)，死細(xì)胞強(qiáng)陽(yáng)?？梢杂迷诠潭?biāo)本中的，區(qū)分樣本固定細(xì)胞狀態(tài)。
圖3. 小鼠脾細(xì)胞7-AAD染色結(jié)果
Fc受體是指細(xì)胞表面能夠與免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgE和IgD)結(jié)合的分子，存在于NK 細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的表面。FcR 能夠與抗體的Fc段結(jié)合，在檢測(cè)時(shí)產(chǎn)生假陽(yáng)性，圖4. 為FcR 封閉前后陽(yáng)性結(jié)果對(duì)比。
圖5. 小鼠脾臟T cell、B cell分析
本服務(wù)項(xiàng)目主要是利用流式細(xì)胞儀和熒光標(biāo)記抗體對(duì)客戶提供的細(xì)胞樣品或全血樣品進(jìn)行檢測(cè)分析?？蓹z測(cè)的項(xiàng)目有：細(xì)胞周期檢測(cè)、細(xì)胞凋亡檢測(cè)、免疫細(xì)胞分型、細(xì)胞表面抗原鑒定、同城上機(jī)檢測(cè)。
六、流式抗體部分高分文獻(xiàn)
