免疫分型(immunophenotyping)是指根據(jù)存在于細(xì)胞表面、核或細(xì)胞質(zhì)中的標(biāo)記物或抗原的類型,利用基于抗體的對(duì)異質(zhì)細(xì)胞群進(jìn)行分析,以鑒定多種目標(biāo)細(xì)胞群的存在及比例。通過使用特異性識(shí)別不同細(xì)胞類型標(biāo)記物或抗原的抗體,從而幫助鑒定細(xì)胞的譜系。例如腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)、浸潤(rùn)免疫細(xì)胞的分析、白血病的診斷等。免疫分型可以利用組織切片(新鮮或固定組織)通過免疫組化方法以及利用細(xì)胞懸液通過流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析。
流式細(xì)胞術(shù)可以說是用于探測(cè)人類免疫表型的首選技術(shù),特別是由于它可以在諸如血液的復(fù)雜混合物中通過測(cè)量許多單個(gè)細(xì)胞上的多個(gè)參數(shù),從而鑒定和分析包括稀有亞群在內(nèi)的許多細(xì)胞亞群。并且由于可用的抗體試劑的擴(kuò)大和實(shí)驗(yàn)方案的不斷調(diào)整,流式細(xì)胞術(shù)不僅可用于評(píng)估細(xì)胞表面蛋白的表達(dá),還可以用于評(píng)估胞內(nèi)蛋白的表達(dá)或修飾水平以及細(xì)胞因子的水平。
T細(xì)胞
T淋巴細(xì)胞可在CD3表達(dá)的基礎(chǔ)上被免疫表型化,隨后進(jìn)一步細(xì)分(如CD8+殺傷性T細(xì)胞和CD4+輔助性T細(xì)胞)。此外,T細(xì)胞表型是靈活的,可以隨不同的微環(huán)境發(fā)生變化;表型也可能重疊在多個(gè)T細(xì)胞群體之間。此外,T細(xì)胞亞群的分類還可能是根據(jù)響應(yīng)某些刺激或磷酸化免疫信號(hào)蛋白(如STAT蛋白)而分泌的特定細(xì)胞因子水平來確定。
殺傷性T細(xì)胞(又被稱作細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞,CD8+)能識(shí)別抗原,這些抗原是由感染因子釋放的,并與宿主細(xì)胞結(jié)合。殺傷性T細(xì)胞能夠識(shí)別多種細(xì)胞類型和病原體并與之相互作用。T細(xì)胞受體與外源抗原結(jié)合,觸發(fā)細(xì)胞毒素向受感染細(xì)胞釋放,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。殺傷性T細(xì)胞的主要鑒定標(biāo)志物就是CD8+,但是如果需要根據(jù)不同生理狀態(tài)下對(duì)殺傷性T細(xì)胞進(jìn)行功能鑒定,還可以進(jìn)一步增加其他標(biāo)志物形成標(biāo)志物組合。比如,對(duì)殺傷性T細(xì)胞進(jìn)一步定義幼稚、中央記憶性、效應(yīng)記憶性和效應(yīng)T細(xì)胞亞群的經(jīng)典標(biāo)志物是基于趨化因子受體7(CCR7;也稱為CD197)和CD45RA(或CD45RO)的表達(dá)情況;對(duì)殺傷性T細(xì)胞進(jìn)一步分析其活化狀態(tài)是基于HLA-DR和CD38的表達(dá)情況1-3。
輔助性T細(xì)胞(即Th1、Th2、Th9、Th17和Tfh細(xì)胞等)具有很少的細(xì)胞毒性活性并且分泌對(duì)其它白細(xì)胞(例如B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞或中性粒細(xì)胞)起作用以清除病原體的細(xì)胞因子。除了CD4這一共有標(biāo)志物,不同輔助性T細(xì)胞還有各自的常用鑒定標(biāo)志物組合,如下圖所示:
調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(即Treg)在維持免疫穩(wěn)態(tài)中起著重要作用,并且也與許多自身免疫性疾病有關(guān)4。迄今為止,已確定了兩種主要類別的CD4+Treg:組成型表達(dá)CD25和FoxP3的天然Tregs(nTreg)以及誘導(dǎo)后激活表達(dá)CD25和FoxP3的誘導(dǎo)型Tregs(iTreg)5。人和小鼠Treg的CD25表達(dá)情況不同。在小鼠中,所有CD25+細(xì)胞都被認(rèn)為是Treg;而在人的免疫系統(tǒng),只有那些高水平表達(dá)CD25的細(xì)胞被認(rèn)為是Treg6。
iTreg來源于胸腺,在某些抗原和專門的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子(如TGF-1、IL-10和IL-2)的刺激下,由單陽性CD4細(xì)胞分化為表達(dá)CD25和Foxp3的Tregs6。還報(bào)告了iTreg群體具有一定的可塑性,可以轉(zhuǎn)化為其他T細(xì)胞亞型,例如Th1和Th17細(xì)胞6。
目前,F(xiàn)OXP3是Treg的最明確的標(biāo)記,盡管有報(bào)道發(fā)現(xiàn)少數(shù)Treg亞群是FOXP3-7。轉(zhuǎn)錄因子Foxp3作為Tregs的標(biāo)志又進(jìn)一步推動(dòng)了其他的Treg標(biāo)記的發(fā)現(xiàn),包括CD127。若干已發(fā)表的報(bào)告證明CD127表達(dá)與Foxp3呈負(fù)相關(guān)8。比如,利用CD4+、CD25+和CD127-組合分選策略,可用于獲得體外可擴(kuò)增的Treg細(xì)胞。
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