文章信息
期刊：ACS nano
影響因子(IF)：13.903
文章名稱：Overcoming the Reticuloendothelial System
Barrier to Drug Delivery with a “Don’t-Eat-Us”
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作者：唐宜軒博士
作者單位：西南大學(xué)
引用抗體：anti-F4/80｜bs-11182R
anti-ZO-1｜bs-1329R
anti-Claudin5｜bs-10296R
Goat Anti-Rabbit IgG antibody/AF488｜bs-0295G-AF488
Goat Anti-Rabbit IgG antibody/HRP｜bs-0295G-HRP
Donkey anti-rabbit IgG/APC｜bs-0295D-APC
文章摘要
制劑的長(zhǎng)循環(huán)遞送是提高藥物在靶部位累積及療效的重要前提。因此，富含巨噬細(xì)胞的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（RES）成為了納米藥物臨床開發(fā)的重要挑戰(zhàn)。為了克服該阻礙，基于CD47蛋白與巨噬細(xì)胞表面受體SIRPα蛋白互作后激發(fā)“don’t-eat-me”信號(hào)通路能夠抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用，我們開發(fā)了一種新型的特異性的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（RES）封閉策略。該策略采用少量的多肽脂質(zhì)體可實(shí)現(xiàn)對(duì)RES的長(zhǎng)期特異性封閉。首先，我們?cè)O(shè)計(jì)了一種CD47蛋白衍生的耐酶解的D型Self肽（DS），并將其標(biāo)記在脂質(zhì)體上（DSL）。靜脈給藥后，DSL進(jìn)入體內(nèi)后會(huì)快速與吞噬細(xì)胞作用。而DS與SIRPα的互作使DSL能夠長(zhǎng)期抑制巨噬細(xì)胞的吞噬能力，使后續(xù)注射的納米制劑可以避免被巨噬細(xì)胞識(shí)別。該策略為長(zhǎng)循環(huán)遞藥研究提供了新的思路，并且因?yàn)闊o需對(duì)遞送系統(tǒng)進(jìn)行額外化學(xué)修飾，該策略可與各類靶向遞藥系統(tǒng)聯(lián)用， 因此具有廣泛的應(yīng)用前景。
文中采用了Bioss公司的F4/80抗體（bs-11182R）、ZO-1抗體（bs-1329R）和Claudin5抗體（bs-10296R）對(duì)肝駐留巨噬細(xì)胞、脾巨噬細(xì)胞以及腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行一抗標(biāo)記，并分別采用了Alexa Fluor 488及CY3標(biāo)記二抗進(jìn)行熒光標(biāo)記。進(jìn)而使作者可以順利對(duì)納米制劑和吞噬細(xì)胞進(jìn)行共定位成像分析，為文章結(jié)論提供了支撐。
圖1. 預(yù)注射DSL可提高PLGA NPs在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間。（a）PLGA NPs的體內(nèi)和（b）體外熒光成像。（c）血液中DiD藥-時(shí)曲線及（d）消除半衰期和（e）AUC，* p <0.05，** p < 0.01，*** p <0.001; NS表示不顯著；數(shù)據(jù)結(jié)果顯示為mean± SD（n = 3）。（f）PLGA NPs和巨噬細(xì)胞/肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的熒光共定位成像。巨噬細(xì)胞以F4 / 80（綠色）標(biāo)記，肝竇內(nèi)皮細(xì)胞用CD31（卡其色）染色，PLGA NPs顯示為紅色，比例尺= 20μm。
圖2. 脂質(zhì)體和庫普弗細(xì)胞（KCs）/肝竇內(nèi)皮細(xì)胞（LSECs）的免疫熒光共定位。脂質(zhì)體注射24h后的肝臟切片。（a）庫普弗細(xì)胞以F4 / 80（綠色）標(biāo)記，（b）肝竇內(nèi)皮細(xì)胞以CD31（綠色）標(biāo)記，脂質(zhì)體以 Liss rhod PE EPC （紅色）標(biāo)記。
圖3. bEnd.3 細(xì)胞中ZO-1及claudin 5的亞細(xì)胞定位。細(xì)胞在蓋玻片上孵育10天，用4%PFA固定并用0.1%TritonX-100處理后，細(xì)胞分別用ZO-1抗體（1:100）和Claudin5抗體（1:100）進(jìn)行染色，然后使用Alexa Fluor488 二抗孵育。DAPI（5μg/mL）染色5分鐘后HCS觀察。
（感謝唐宜軒博士和《ACS NANO》提供素材！侵刪?。?/span>
Bioss相關(guān)抗體
CD31 bs-0195R 
交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep
產(chǎn)品應(yīng)用: WB=1:500-2000 Flow-Cyt=1μg/Test
應(yīng)用: Western Blot 應(yīng)用: Flow cytometry
樣本: Human U937 樣本: Human HL60
稀釋度: 1/300 稀釋度: 3μg/1x106 cells
SIRPα bs-2708R
交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse
產(chǎn)品應(yīng)用: WB=1:500-2000 Flow-Cyt=1μg /test
應(yīng)用: Western Blot 應(yīng)用: Flow cytometry
樣本: Mouse Spleen&Bone 樣本: Human U937
稀釋度: 1/300 稀釋度: 3μg/1x106 cells
