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提供ELISA檢測(cè)技術(shù)服務(wù)
發(fā)表者：北京博奧森生物 發(fā)表時(shí)間：2016-2-15
◇服務(wù)內(nèi)容：
凡購(gòu)買(mǎi)本司目錄任何一種檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫、免疫組化、放射免疫），您只需將需要檢測(cè)的動(dòng)物（Human,Rat,Mouse,Rabbit,Pig,Monkey……）種類(lèi)和檢測(cè)指標(biāo)（介素類(lèi)、因子類(lèi)）及標(biāo)本數(shù)量（48T/96T）通知我司業(yè)務(wù)人員即可。在接到客戶(hù)標(biāo)本當(dāng)日起，一周內(nèi)將檢測(cè)報(bào)告交到客戶(hù)手中?。ㄓ捎跇?biāo)本須低溫保存，故標(biāo)本代測(cè)服務(wù)只限北京本地客戶(hù)。）
◇質(zhì)量保證：
檢測(cè)用所有試劑全部都為進(jìn)口試劑，適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本，靈敏度極高，多年專(zhuān)業(yè)酶免服務(wù)，我們保證對(duì)所售任何產(chǎn)品一概負(fù)責(zé)到底，每一份實(shí)驗(yàn)結(jié)果都真實(shí)可靠！
◇注意事項(xiàng)：
在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè)，對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，請(qǐng)?jiān)炷Ｈ〔暮?，將?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。代測(cè)放免標(biāo)本的客戶(hù)取材前須向我司銷(xiāo)售人員索要說(shuō)明書(shū)，具體操作注意事項(xiàng)請(qǐng)與我司技術(shù)人員溝通。
◇液體類(lèi)標(biāo)本：
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
*血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
*血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
*尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
*細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
*組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
ELISA方法簡(jiǎn)介
1.包被抗原：稀釋液pH 9.6 碳酸鹽緩沖液，多肽濃度2ug/ml，0.1ml/孔，4ºC過(guò)夜，洗凈。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸鹽緩沖液) 封閉，0.1ml/孔，37ºC1h，洗凈。
3.稀釋抗血清(可稀釋不同濃度) 0.1ml/孔，37ºC 30分鐘，洗凈。
4.稀釋辣根過(guò)氧化物每標(biāo)記的二抗 0.1ml/孔，37ºC 40分鐘，洗凈。
5.顯色
A液：四甲基聯(lián)苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0檸檬酸緩沖液稀釋100倍.
B液：5ul雙氧水加蒸餾水12.5ml 。
終止液：2N硫酸
A液、B液各一滴，比光顯色10分鐘，終止液一滴。
6.450nm 波長(zhǎng) 測(cè)OD值
