據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會19日通報，6月18日0—24時，31個?。ㄗ灾螀^(qū)、直轄市）和新疆生產(chǎn)建設兵團報告新增確診病例32例，其中境外輸入病例4例（廣東3例，甘肅1例），本土病例28例（北京25例，河北2例，遼寧1例）；無新增死亡病例；新增疑似病例2例，均為本土病例（均在北京）。
文章背景
根據(jù)目前對SARS-CoV生命周期的認識，核衣殼蛋白由宿主細胞翻譯表達，主要定位于胞漿。核衣殼蛋白的主要功能是將病毒基因組包裝進核衣殼以保護基因組RNA。在核衣殼形成過程中，大量的核衣殼蛋白與病毒RNA結合并寡聚。病毒的繁殖策略是盡可能多地合成核衣殼蛋白，以滿足病毒組裝的需要，這就意味著核衣殼蛋白會生產(chǎn)過剩，而冗余的核衣殼蛋白會干擾宿主細胞的正常生理活動。
嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2(SARS-CoV-2)是COVID-19的病原體，與SARS-CoV的基因組同源性為79%。預測SARS-CoV-2共有12個編碼區(qū)，包括刺突蛋白、核衣殼蛋白、包膜蛋白和膜蛋白。越來越多的證據(jù)表明，SARS-CoV-2的刺突蛋白通過與人ACE2結合進入宿主細胞，表明SARS-CoV-2可能與SARS-CoV具有相似的致病機制。
ACE2在多種干細胞中表達
由于ACE2是細胞膜上SARS-CoV-2的主要受體，研究首先檢測了ACE2是否在干細胞中表達。圖1A顯示了不同項目的不同干細胞中ACE2的表達值，包括人類胚胎干細胞、iPSC、人類上皮干細胞、人類脂肪干細胞、人類造血干細胞和人類間充質干細胞。同時收集housekeeping基因GAPDH的表達值作為對照。ACE2在不同類型的干細胞中均有表達，但與GAPDH相比表達量相對較低。逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-RCR)結果顯示ACE2在iPSC、iPSC衍生心肌細胞(iPS -CM)和人冠狀動脈內皮細胞(HCAEC)中表達，提示這些細胞是SARS-CoV-2的潛在靶點（圖1B）。
nCoVN的過度表達促使iPSC向成纖維細胞分化
為了研究nCoVN是否干擾iPSC的生理活性，該研究采用慢病毒表達系統(tǒng)建立了一種誘導性多能干細胞系(iPSC-nCoVN)，在該系統(tǒng)中，nCoVN的cDNA序列轉錄依賴于Dox的誘導。經(jīng)普羅霉素篩選后，iPSC-nCoVN分為兩組：一組用Dox誘導nCoVN表達(Dox+)，另一組用DMSO作為對照組(DMSO+)。實時PCR檢測iPSC、Dox+和DMSO+組nCoVN的轉錄水平。在Dox+組中，nCoVN的表達增加了267倍（圖2A）。用細胞計數(shù)試劑-8比較iPSC組和Dox+組的增殖率。細胞接種3天后，iPSC的增殖率高于Dox+組，說明nCoVN可能阻礙iPSC的生長和分裂（圖2B）。繼續(xù)在iPSC中誘導nCoVN的表達，7天后，一些亞克隆的形態(tài)開始改變；誘導14天后，大多數(shù)細胞呈現(xiàn)出與野生型iPSC不同的形態(tài)；誘導28天后，出現(xiàn)典型的成纖維細胞樣形態(tài)（圖2C）。用抗成纖維細胞標志物α-SMA (Bioss, bsm-33187M, 鼠單抗)和S100A4 (Bioss, bs-3759R, 兔多抗)的抗體來驗證這些成纖維細胞樣細胞的類型，免疫熒光分析結果證實Dox+細胞已轉變?yōu)槌衫w維細胞（圖2D）。
nCoVN的過表達抑制了iPSC的多能性
接下來，研究檢測了iPSC和iPSC-nCoVN中的多能性標記。多能性標記SSEA4和TRA-1-81在人胚胎干細胞和iPSC的細胞膜上表達，廣泛應用于多能性干細胞的鑒定。免疫熒光分析獲得的圖像清楚地說明，iPSC-nCoVN完全失去了SSEA4和TRA-1-81的表達，即iPSC-nCoVN在nCoVN存在的情況下失去了多能性（圖3）。
為了進一步檢測iPSC和iPSC-nCoVN的多能性，研究者又采用常規(guī)方法在相同條件下將這些細胞直接分化為心肌細胞。正如預期的那樣，iPSC的分化效率可以達到60%；然而，在分化第12天，只有很小的一部分細胞表達了心肌肌鈣蛋白T，同時伴隨著大多數(shù)細胞死亡（圖4）。這種分化實驗提供了確鑿的證據(jù)，證明nCoVN破壞了iPSC-nCoVN的多能性維持。
這項研究指出，nCovN在人類誘導的多能干細胞中可以消除其多能性，降低增殖率，但不引起細胞凋亡。盡管采用了干細胞培養(yǎng)條件，nCovN的長期表達仍促使iPSC向成纖維細胞分化。據(jù)報道，SARS冠狀病毒核衣殼蛋白促進TGF-β誘導的PAI-1表達，促進肺纖維化，這也是nCovN將iPSC轉化為成纖維細胞的可能途徑。此外，nCovN如何打破iPSC的多能性維護仍是一個謎。干細胞的多能性維持需要精細的調控，以維持復雜網(wǎng)絡中多能性基因表達的平衡。由于nCovN具有結合RNAs的能力，nCovN可能通過占據(jù)RNAs的特定位點來抑制關鍵多能性基因的翻譯。盡管nCovN的作用機制尚不清楚，但其毒性作用提示SARS-CoV-2可能損害生殖系統(tǒng)和造血系統(tǒng)。
（此文章來源于《MedRxiv》，侵刪！）
面對如此狡猾又“全能”的病毒，當前甚至很長一段時間內，我們都將處于缺乏新冠特效藥，沒有百分百有效的預防措施和疫苗的階段。未來我們要做的是：勇于接受挑戰(zhàn)，客觀評估風險，科學調整管控級別，學會與新冠長期共存。在采取規(guī)范的預防措施的同時，恢復正常的生活秩序。
