導(dǎo)讀:
熒光抗體標(biāo)記技術(shù)是將熒光標(biāo)記物以化學(xué)方法與特異性抗體共價結(jié)合，在抗體-熒光結(jié)合物與對應(yīng)的抗原特異結(jié)合后，通過熒光顯微鏡等儀器設(shè)備觀察熒光標(biāo)記物的信號情況，從而實現(xiàn)對待檢物的定位、定性或定量檢測。在實驗過程中，我們經(jīng)常會遇到如何選擇熒光標(biāo)記物、多重?zé)晒鈾z測時如何進(jìn)行熒光標(biāo)記物的搭配等問題。為此，小編特意采訪了Bioss抗體標(biāo)記專家，讓我們一起聽聽專家的分享吧~
Q1:市面上的熒光標(biāo)記物很多，如何判斷一個熒光標(biāo)記物是否適合標(biāo)記抗體呢？
作為標(biāo)記的熒光標(biāo)記物應(yīng)符合以下要求：
● 具有能與抗體形成共價鍵的化學(xué)基團(tuán)，且與抗體結(jié)合后不易解離，同時未結(jié)合的熒光標(biāo)記物及其降解產(chǎn)物易于清除；
● 熒光效率高，在與抗體結(jié)合后仍能保持較高的熒光效率；
● 與抗體結(jié)合后不影響抗體原有的生化與免疫性質(zhì)；
● 標(biāo)記方法簡單，安全無毒；
● 與抗體結(jié)合穩(wěn)定，終產(chǎn)物易于保存。
Q2:在Bioss實驗室，經(jīng)常用到哪些熒光標(biāo)記物，可以推薦一些嗎？
Bioss實驗室可以提供基于29種標(biāo)記方式的標(biāo)記抗體產(chǎn)品及標(biāo)記服務(wù)，比較常用的有：
● 小分子熒光素：FITC, Rhodamin● Cy系列：Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7
● Alexa Fluor系列：AF350, AF488, AF555, AF594, AF647, AF680, AF750
● 熒光蛋白：PE, APC, PerCP
● 熒光串聯(lián)標(biāo)記：PE-Cy, PerCP-Cy等
Q3:以上提到的熒光標(biāo)記物，經(jīng)常會用于哪些實驗?zāi)兀?/span>
下表匯總了不同種類熒光標(biāo)記物的適用實驗類型，供大家參考
Q4:對于有多重?zé)晒鈾z測需求的實驗應(yīng)用，比如多重免疫熒光檢測和流式細(xì)胞術(shù)等，在做多重?zé)晒馊旧桨冈O(shè)計時，需要遵循哪些原則？
在Bioss實驗室，我們做多重?zé)晒鈾z測設(shè)計實驗時，一般會遵循以下原則：
● 確認(rèn)檢測設(shè)備的參數(shù)：熒光顯微鏡通常是一個鹵素光源配若干個濾光片，流式細(xì)胞儀通常是2-3個激光管配若干個檢測通道；
● 在可選范圍內(nèi)選擇更強的熒光，常用熒光及其強弱程度排序: PE>APC>PE-Cy5>PE-Cy5.5/PerCP-Cy5.5>FITC；
● 細(xì)胞表面蛋白可以選擇PE等熒光蛋白，需要進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)的檢測，盡量選擇小分子熒光素；
● 對熒光多重染色，熒光素與抗體組合需要考慮目的抗原的含量，樣本中含量低的指標(biāo)優(yōu)先選擇熒光較強的熒光素。如果是分步加入熒光抗體，考慮到熒光的衰減，按照熒光素的強弱排序依次加入。
